01?人源化單克隆抗體概述

1.1 單克隆抗體（Monoclonal antibody）

1.2 人源化單克隆抗體（Humanized monoclonal antibody）

又稱互補(bǔ)決定區(qū)移植抗體，是在單克隆抗體的技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來。人源化單克隆抗體是將單克隆抗體的氨基酸序列置換為人源序列，既保留能與抗原結(jié)合的特性，又具有與天然人源抗體相似或相同的結(jié)構(gòu)特性。

1.3 人源化單克隆抗體的分類及制備方法

根據(jù)人源化程度，可將人源化單克隆抗體分成三類：嵌合抗體、改型抗體和全人源抗體。當(dāng)前，人源化單克隆抗體的制備方法主要有基因重組表達(dá)和基因工程小鼠兩種。

基因重組表達(dá)法：先構(gòu)建抗體的基因表達(dá)載體，然后利用原核、真核等表達(dá)系統(tǒng)，在體外進(jìn)行抗體表達(dá)。

基因工程小鼠法：先用人源目的基因置換小鼠抗體基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠模型，再通過經(jīng)典的雜交瘤細(xì)胞技術(shù)獲得細(xì)胞系，進(jìn)而制備人源化單克隆抗體。小鼠基因組與人類基因組高度相似，且更易于操作和改變，所以通過基因工程小鼠技術(shù)產(chǎn)生的人源化單克隆抗體，其生物學(xué)特性與人源抗體更接近。

維潤(rùn)賽潤(rùn)的人源化單克隆抗體是采用基因工程小鼠法。

人源化單克隆抗體可以應(yīng)用于體外診斷領(lǐng)域，用于制備參考品（質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品）和免疫測(cè)定（包被原和標(biāo)記原）。

當(dāng)前，商品化的抗原類參考品（質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品），其目標(biāo)分析物來源于病態(tài)血清或重組蛋白。但是商品化的抗體類參考品主要來源于病態(tài)血清。究其原因，就是參考品與檢測(cè)試劑盒的適配問題。

以間接ELISA檢測(cè)抗體為例。在該免疫測(cè)定中，抗體參考品有兩個(gè)主要功能：a.特異性結(jié)合固相上的包被原；b.被二抗特異性結(jié)合。

檢測(cè)人抗體的試劑盒，其配套的二抗（如鼠抗人、羊抗人等）只能特異性結(jié)合人源抗體，不能識(shí)別鼠源或其他動(dòng)物源性的抗體。因此，目前應(yīng)用廣泛的鼠源抗體，不適合制備抗體參考品。

人源化單克隆抗體可以特異性結(jié)合包被原，其顯著特點(diǎn)是氨基酸序列經(jīng)過人源化改造，具有與天然人源抗體一致的生物學(xué)特性，可以被鼠抗人、羊抗人等二抗結(jié)合。

因此，人源化單克隆抗體滿足作為抗體參考品的要求，適用于制備質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品

2.1.2 人源化單克隆抗體制備參考品的應(yīng)用舉例

? ? A.雅培Abbott用弓形蟲人源化單克隆抗體制備質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，與試劑盒配套的參考品對(duì)比。結(jié)果顯示，兩者呈正相關(guān)，IgG類人源化單克隆抗體的r2是0.985，IgM類人源化單克隆抗體的r2是0.999。

結(jié)果證明，所用的弓形蟲人源化單克隆抗校準(zhǔn)品與人血漿校準(zhǔn)品的靈敏度高度相近。

B. 雅培Abbott測(cè)試了弓形蟲人源化單克隆抗體與其他病原體的交叉反應(yīng)情況。結(jié)果顯示，病態(tài)血清來源的質(zhì)控品與登革熱病毒、EB病毒、人類單純皰疹6型、鉤端螺旋體、水痘-帶狀皰疹病毒、西尼羅病毒產(chǎn)生嚴(yán)重的交叉反應(yīng)，而人源化單克隆抗體制備的質(zhì)控品無(wú)此現(xiàn)象。

結(jié)果證明，相比病態(tài)血清來源的質(zhì)控品，人源化單克隆抗體制備的質(zhì)控品具有更高的特異性。

小結(jié)：

人源化單克隆抗體可以用于制備參考品（質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品），且因?yàn)閱慰寺】贵w本身具備的高均一性、高親和力、高特異性和可工業(yè)化量產(chǎn)等特點(diǎn)，是制備參考品的最佳選擇之一。

以雙抗體夾心法的HAMA效應(yīng)為例。人抗鼠抗體（ Humananti-mouse antibody，HAMA）存在臨床血清（漿）標(biāo)本中，這些抗體可以跟免疫測(cè)定使用的鼠源抗體結(jié)合，干擾免疫分析系統(tǒng)，造成試驗(yàn)結(jié)果偏差，稱之為HAMA效應(yīng)。在無(wú)抗原存在情況下，HAMA可以橋連包被抗體和標(biāo)記抗體，造成假陽(yáng)性。在抗原存在情況下，HAMA與標(biāo)記抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被抗體，造成假陰性。（同理，其他動(dòng)物源性抗體也能產(chǎn)生此現(xiàn)象）

人源化單克隆抗體不能被HAMA結(jié)合，可以有效避免HAMA效應(yīng)。

A. 丁衛(wèi)平的血篩研究表明，獻(xiàn)血者HBsAg和HIV雙假陽(yáng)性是由HAMA導(dǎo)致。該批血液樣本經(jīng)疾控中心檢測(cè)，顯示HAMA濃度為50.5 ng/mL（正常參考值：5.0-12.5 ng/mL）。

B.在譚詩(shī)的報(bào)告中，樣本用HBR阻斷劑處理前后，檢測(cè)結(jié)果相差較大。證明HAMA可以影響檢驗(yàn)結(jié)果。

C. 在Yong Xie的研究中，分別檢測(cè)HAMA與hHP-1（人源化單克隆抗體）、HP-1（鼠源性單克隆抗體）、天然人IgG的結(jié)合情況。結(jié)果表明，HAMA可以與HP-1（鼠源性單克隆抗體）結(jié)合，影響檢測(cè)結(jié)果，而hHP-1（人源化單克隆抗體）和天然人IgG均不受影響。

小結(jié)：

人源化單克隆抗體用于免疫測(cè)定，可以有效避免內(nèi)源性干擾，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

03 維潤(rùn)賽潤(rùn)人源化單克隆抗體

·產(chǎn)品信息

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·產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

★?質(zhì)量體系：

DINEN ISO 13485；歐盟指令98/79/EC。

★?產(chǎn)品性能：

高親和力；高特異性；批間差?。弧?年有效期。

★?應(yīng)用范圍：

參考品；免疫測(cè)定。

★?產(chǎn)能保證：

工業(yè)化量產(chǎn)，穩(wěn)定供貨。