分子診斷POCT是近幾年的熱門(mén)話(huà)題。作為未來(lái)分子診斷發(fā)展的熱門(mén)方向，分子診斷POCT集合了小巧、靈活、方便、快速、精準(zhǔn)等特點(diǎn)，在應(yīng)用場(chǎng)景和應(yīng)用領(lǐng)域上比傳統(tǒng)的分子診斷更多更廣。這也是目前國(guó)內(nèi)外診斷企業(yè)紛紛布局這一領(lǐng)域原因。那么實(shí)現(xiàn)PCR分子診斷POCT一般需要具備哪些基本要素？

01、多重PCR技術(shù)

一般來(lái)講，分子POCT的擴(kuò)增管比較少，所以掌握多重PCR技術(shù)能夠讓你在有限空間實(shí)現(xiàn)更多的位點(diǎn)檢測(cè)。

02、試劑常溫技術(shù)

分子診斷POCT能夠在應(yīng)用場(chǎng)景上拓展，試劑常溫技術(shù)尤為關(guān)鍵。試劑常溫運(yùn)輸儲(chǔ)存即降低冷鏈運(yùn)輸?shù)某杀居謳?lái)使用上的便捷。

試劑常溫技術(shù)一般分為兩種：液體試劑常溫技術(shù)和干式試劑常溫技術(shù)。

液體常溫技術(shù)：

是通過(guò)對(duì)PCR體系中的酶做一些化學(xué)修飾，來(lái)實(shí)現(xiàn)酶在體系在短時(shí)間的常溫穩(wěn)定，以此實(shí)現(xiàn)常溫運(yùn)輸，0-10℃或-20℃儲(chǔ)存。目前Taq酶的化學(xué)修飾已經(jīng)得到實(shí)現(xiàn)，但對(duì)于體系中的其他酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）的修飾還需更多的研究投入。

干式試劑常溫技術(shù)：

是通過(guò)對(duì)PCR體系（包含酶等活性成分）的冷凍干燥，實(shí)現(xiàn)常溫運(yùn)輸常溫存儲(chǔ)或常溫運(yùn)輸0-10℃儲(chǔ)存。國(guó)外廠(chǎng)家早在幾年前就掌握了干式試劑常溫技術(shù)，國(guó)內(nèi)目前也有不少?gòu)S家實(shí)現(xiàn)了這一技術(shù)。只是國(guó)內(nèi)廠(chǎng)家目前絕大部分實(shí)現(xiàn)的是干式粉末技術(shù)，對(duì)于干式球形技術(shù)掌握的極少。干式球形技術(shù)是實(shí)現(xiàn)批量化生產(chǎn)，降低成本的關(guān)鍵。

03、快速提取純化技術(shù)

經(jīng)典的分子診斷POCT即要快速也要精準(zhǔn)，所以核酸的提取純化是精準(zhǔn)的要素。

直擴(kuò)的方法如果從體系和釋放劑的配方上深入研究，達(dá)到與提取純化后擴(kuò)增的靈敏度也是有可能的，但從樣本的普適性上來(lái)講，直擴(kuò)的方法范圍更窄，只能適用部分項(xiàng)目的某一類(lèi)樣本的檢測(cè)。

核酸提取純化也不能像傳統(tǒng)的提?。ㄌ崛r(shí)間一般20-30分鐘）一樣，要在提取效果和提取時(shí)間上找到平衡點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)核酸快速提取純化。

04、封閉式卡盒的設(shè)計(jì)

分子診斷POCT的關(guān)鍵之一，在于封閉式卡盒的設(shè)計(jì)?！昂怂岬奶崛?、加樣及擴(kuò)增全過(guò)程在封閉式的小卡盒在完成。”簡(jiǎn)單的一句話(huà)，難倒了眾多開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)者。

難點(diǎn)在于快速提取過(guò)程如何移液、純化后的核酸如何加入到體系中、卡盒需要預(yù)留什么樣的機(jī)構(gòu)與儀器設(shè)備配合。

突破這些難點(diǎn)以后，你還需要考慮如何低成本制造，試劑如何批量化生產(chǎn)。

因此設(shè)計(jì)一個(gè)可產(chǎn)業(yè)化的封閉式卡盒是實(shí)現(xiàn)分子診斷POCT的基本要素也是關(guān)鍵。

05、配套的分子診斷POCT儀器

這類(lèi)儀器的基礎(chǔ)在于，提取部分必須能到在機(jī)械機(jī)構(gòu)上配合卡盒，PCR擴(kuò)增部分必須實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)增多熒光通道擴(kuò)增。