干擾實驗?zāi)康臑榉治鰳颖颈旧砗蜆颖臼褂眠^程中潛在的干擾物質(zhì)，確定干擾物濃度/水平和干擾實驗的接受標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)干擾實驗的實驗方案設(shè)計有國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布的《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WST 416-2013《干擾實驗指南》》（以下簡稱“《干擾實驗指南》”），CLSI發(fā)布的《EP7-A2:Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition》

（以下簡稱“CLSI-EP7-A2”）等。所以干擾實驗的實驗方案設(shè)計思路較明確，但所涉及內(nèi)容較多，所以小編在此篇中主要梳理一下上述2個文件中所涉及的主要內(nèi)容，其內(nèi)容適用范圍為定性檢測試劑干擾評估實驗設(shè)計。?

干擾實驗一般可采用配對比對的方式，比較干擾樣本和不包含或含正常濃度水平干擾物樣本檢測結(jié)果間差異。如果差異超出接受范圍，再進(jìn)一步研究該干擾物質(zhì)的濃度水平。實施干擾實驗基本上分為以下步驟：干擾物選擇、干擾物的實驗濃度、實驗樣本與對照樣本選擇與制備、確定干擾實驗的接受標(biāo)準(zhǔn)，下面進(jìn)行一一講解。

第一、?干擾物選擇

干擾實驗開始前應(yīng)根據(jù)被評價方法的檢測原理和預(yù)期用途列出可能引起干擾效果的物質(zhì)清單。常見的可能產(chǎn)生干擾作用的物質(zhì)有：

• 樣本中的異常物質(zhì)：高濃度的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯。

  
  

• 藥物：常見處方與非處方藥，接受某項目檢測的特定病人群體中常用的藥物。

  
  

• 代謝物：在特定病人群體中可能出現(xiàn)的異常生化代謝物與藥物代謝物。

  
  

• 樣本添加劑及在樣本采集與處理過程中可與之接觸的物質(zhì)：抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鹽、草酸鹽等）與防腐劑（NaF、HCl、碘醋酸鹽等），血清分離膠，樣本采集容器及膠塞、導(dǎo)管、導(dǎo)管沖冼液、皮膚消毒劑、手部清潔劑、玻璃清洗液、手套粉未等。

  
  

• 文獻(xiàn)中提及的對與被評價方法類似的其他方法有干擾作用的物質(zhì)。

  
  

• 飲食：咖啡因、β-胡蘿卜素、罌粟籽等。

第二、干擾物的實驗濃度

進(jìn)行干擾實驗時干擾物的濃度可根據(jù)表1中的原則確定，常見可能內(nèi)源性干擾物的建議實驗濃度見《干擾實驗指南》附錄C或CLSI-EP7-A2文件附錄D（appendix D.Interference Test Concentrations for Endogenous Analytes），藥物干擾物的建議實驗濃度請參見有關(guān)文獻(xiàn)。

（表1 干擾物的實驗濃度確定原則）

第三、實驗樣本與對照樣本制備

建議采用包含弱陽性樣本在內(nèi)的至少兩個靶物質(zhì)濃度水平的樣本進(jìn)行干擾研究。干擾實驗樣本形式可選擇臨床真實樣本或采用人工添加干擾物的形式制備。以下為采用人工添加干擾物的形式制備方法：

1、基礎(chǔ)樣本

從未服用過藥物的健康人群中采集新鮮標(biāo)本（血清、尿液等），將標(biāo)本混勻后即成為基礎(chǔ)樣本。

如新鮮標(biāo)本難以取得，也可采用冰凍或凍干樣本。但應(yīng)注意這類樣本中含有防腐劑與穩(wěn)定劑或其他可能會對檢測結(jié)果造成影響的成分。因此在應(yīng)用此類樣本之前應(yīng)參照相應(yīng)國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對其基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評價。

確定基礎(chǔ)樣本中的被測量濃度，可通過添加純分析物使樣本中被測量濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平。

2、干擾物原液

干擾物質(zhì)的純品多為固體，需要用適當(dāng)?shù)娜軇⑵淙芙猓瞥筛蓴_物原液。如所用的是藥品級制品，應(yīng)注意所含賦形劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、著色劑、調(diào)味劑、金屬氧化物、填充物等對檢測結(jié)果造成的影響。

溶劑應(yīng)使干擾物充分溶解且不會影響檢測結(jié)果。常用溶劑有純水、HCl 或NaOH溶液、乙醇或甲醇、丙酮、二甲基亞砜等。

原液濃度應(yīng)至少20倍于實驗濃度，以減少對基礎(chǔ)樣本基質(zhì)的稀釋。應(yīng)注意防止有機溶劑的揮發(fā)并考慮其在水中的溶解度。

常見干擾物溶解方式見CLSI-EP7-A2文件附錄G（AppendixG.Preparation of Test Solutions for Interferece Testing）。

3、實驗樣本與對照樣本

以20倍于實驗濃度的干擾物原液為例，實驗樣本與對照樣本的制備方法見表2。注意樣本制備時取樣體積；

表2 實驗樣本與對照樣本的制備方法

第四、?確定干擾實驗的接受標(biāo)準(zhǔn)

可結(jié)合產(chǎn)品的特點，設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn)，并詳述設(shè)定依據(jù)。對于可給出量值數(shù)據(jù)或計數(shù)結(jié)果的定性檢測試劑，如OD值、Ct值，一般可依據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、生物學(xué)變異等設(shè)定產(chǎn)品的可接受范圍。

附：常見內(nèi)源干擾物的建議實驗濃度及溶解方式：